PCR,即聚合酶鏈反應,是分子生物學研究和實驗的常規方法,也是廣泛應用于生物學,醫學和臨床領域的實驗技術。它的特點是可以大大增加DNA的痕量。實驗室分為四個區域,每個工作區域必須嚴格按一個方向輸入。不同的工作區域使用不同的工作服(例如,不同的顏色)。工人離開每個工作區時不得帶工作服。四個領域是:
1.試劑準備區
2.樣品處理區
3.核酸擴增區
4.產品分析區域
PCR實驗室可以是分散形式或組合形式。為了完成一組PCR實驗,通常應完成試劑制備,樣品處理,核酸擴增和產物分析的四個實驗過程。如果實驗技術要求,則應增加樣品破碎過程。
1.分散PCR實驗室
所謂的分散式PCR實驗室是指完成上述實驗過程的實驗室彼此遠離,并以分散的形式布置。對于具有這種布置的PCR實驗室,由于每個實驗都很難相互干擾,因此不需要特殊條件。
2.組合式PCR實驗室
所謂組合PCR實驗室是指將完成PCR的四個實驗過程的實驗室彼此相鄰布置以形成獨立的實驗區域的形式。對于組合PCR實驗室,由于各種實驗的集中安排,很容易引起相互干擾。因此,對整體布局和屏障系統有一定的要求。每個房間的入口處都有緩沖室,以減少室內和室外空氣的交換。試劑制備室和樣品處理室應有輕微的正壓,以防止含有核酸氣溶膠的空氣進入并造成污染;核酸擴增室和產物分析室應具有輕微的負壓,以防止含氣溶膠的核酸擴散到污染試劑和樣品中。
如果使用熒光PCR儀,則可以將擴增室和產物分析室合并在一起。
如果房間深度允許,可以在PCR內設置專用走廊。需要指出的是,在減少室內和室外空氣的交換中,緩沖室比專用走廊更有意義。
每個區域之間應存在單向實驗過程流,物流,人員流和空氣流,以形成單向過程的保護性屏障,以避免實驗之間的相互干擾并防止核酸氣溶膠污染實驗過程和產生錯誤的結果。
PCR實驗室的氣流方向必須嚴格按照逐漸降低試劑存儲和制備區域→樣品制備區域→擴增區域→擴增產物分析區域中的氣壓的方法進行,以防止擴增產物進入反應室。放大前的區域以及氣流。需要嚴格的通風設計。如果通風設計不合理,風速將會混亂甚至危害人體健康。
進入實驗室區域的工人應遵循以下路徑:
公共清潔區更衣室(換洗衣服)-緩沖室-實驗區污染
工作人員離開實驗室的途徑是:
污染測試區-緩沖間-淋浴房(如果可能的話可以設置)-更衣室-公共清潔區
標準PCR實驗室設計規范
1.主要結構
主體是彩色鋼板和鋁合金型材。房間內的所有內角和外角均由帶有內部圓形鋁的鋁合金50制成,以解決易污染,積塵,難以清潔的問題。結構牢固,線條簡潔,外觀大方,密封性好。
2.標準的三區分離和氣壓調節
PCR過程分為三個獨立的實驗區域:試劑制備,樣品制備和PCR擴增檢測。整個區域都有一條整體的緩沖走廊。每個獨立的實驗區域都配備了緩沖區,每個區域都通過氣壓進行調節,以防止試劑和樣本在整個PCR實驗過程中受到氣溶膠的污染,并減少擴增產物對人員和環境的污染。
緩沖液Ⅰ,緩沖液Ⅱ和PCR擴增區的排風扇可以打開排氣。實驗區域的外墻和每扇門都裝有可調節風量的回風孔,空氣通過回風孔排入房間。 。
3.消毒
紫外線燈安裝在三個實驗區域和三個緩沖區的頂部以及透射窗內部,用于消毒。
在試劑制備區和標本制備區,還安裝了移動式紫外線燈,以對實驗臺進行局部消毒。
4.機械聯鎖不銹鋼傳送窗
試劑和標本通過機械互鎖不銹鋼(不建議使用電子互鎖方法)傳輸窗口交付,以確保在傳輸過程中不污染試劑和標本(個人分流)。
5.地面
建議使用PVC卷曲地板或自流地板作為地面,其完整性要好。易于清潔且耐腐蝕。如果沒有條件,可以使用水磨石地面,或者大瓷磚的接縫(至少800mm×800mm)應小于2mm。
6.照明
該燈應為純凈燈,以達到易于清潔,無灰塵堆積的特點。
pcr實驗室施工過程中應注意:
●標準的安裝流程和全面的服務流程。
●嚴格遵循標準化,科學設計的安裝過程。
●安裝前,需要確定以下安裝條件:電源電壓,電源入口位置,電話網線入口位置,進水口壓力,最小安裝空間,地面平整度,通風口,入口管和落水管位置等。,理想的空間尺寸和通風口尺寸。
●實驗室的墻壁,包括天花板,應具有牢固的結構和良好的氣密性;所有內角應采用弧形過渡;墻壁應光滑,不吸水,耐腐蝕,易于清潔和消毒;地板材料應符合間隙,無泄漏,光滑度和耐腐蝕的要求。